Микроскопия поверхностного плазмонного резонанса - Surface plasmon resonance microscopy

Микроскопия поверхностного плазмонного резонанса (SPRM), также называется поверхностная плазмонная резонансная томография (SPRI),[1] это бесплатный аналитический инструмент, который сочетает в себе поверхностный плазмонный резонанс металлических поверхностей с отображением металлической поверхности.[2]Неоднородность показатель преломления металлической поверхности дает высококонтрастные изображения, вызванные сдвигом резонансного угла.[1] SPRM может обеспечить чувствительность к толщине субнанометра [3] а поперечное разрешение достигает значений микрометрового масштаба.[4] SPRM используется для характеристики поверхностей, таких как самособирающиеся монослои, многослойные пленки, металл наночастицы, массивы олигонуклеотидов, и реакции связывания и восстановления.[5][6][7][8][9] Поверхностные плазмонные поляритоны представляют собой поверхностные электромагнитные волны, связанные с колеблющимися свободными электронами на металлической поверхности, которые распространяются вдоль границы раздела металл / диэлектрик.[10] Поскольку поляритоны очень чувствительны к небольшим изменениям показателя преломления металлического материала,[11] его можно использовать в качестве биосенсорного инструмента, не требующего маркировки. Измерения SPRM можно производить в реальном времени,[12] например, измерение кинетики связывания мембранные белки в одиночных камерах,[13] или гибридизация ДНК.[14][15]

История

Концепция классического SPR существует с 1968 года, но метод визуализации SPR был введен в 1988 году Ротенхаузлером и Кноллем.[нужна цитата ] Получение изображения с высоким разрешением низкоконтрастных образцов для оптических методов измерения было практически невыполнимой задачей до появления техники SPRM, которая появилась в 1988 году. В методе SPRM для освещения используются волны плазмонного поверхностного поляритона (PSP).[16] Проще говоря, технология SPRI - это усовершенствованная версия классического анализа SPR, при котором образец контролируется без метки с помощью камеры CCD. Технология SPRI с помощью камеры CCD дает преимущество записи сенсограмм и изображений SPR и одновременно анализирует сотни взаимодействий.[17]

Принципы

Поверхностные плазмоны или поверхностные плазмонные поляритоны генерируются за счет взаимодействия электрического поля со свободными электронами в металле.[18][19] Волны ППР распространяются вдоль границы раздела между диэлектриками и проводящим слоем, богатым свободными электронами.[20]

Как показано на Рисунке 2, когда свет проходит от среды с высоким показателем преломления ко второй среде с более низким показателем преломления, свет полностью отражается при определенных условиях.[21]

Чтобы получить полное внутреннее отражение (TIR), θ1 и θ2 должен находиться в определенном диапазоне, который можно объяснить с помощью закона Снеллиуса. Когда свет проходит через среду с высоким показателем преломления в среду с более низким показателем преломления, он отражается под углом θ2, который определен в уравнении 1.[нужна цитата ]

 

 

 

 

(Уравнение 1)

SPRM Изображение 2.
Рис. 2. Полное внутреннее отражение (TIR), падающий луч света под углом θ1, проходит через среду с показателем преломления η1, луч отражается назад под углом θ2, когда показатель преломления среды изменяется до значения η2.

В процессе ПВО некоторая часть отраженного света пропускает небольшую часть напряженности электрического поля в среду 2 (η1 > η2). Свет, просачивающийся в среду 2, проникает как исчезающая волна. Интенсивность и глубину проникновения затухающей волны можно рассчитать согласно уравнениям 2 и 3 соответственно.[22]

 

 

 

 

(Уравнение 2)

 

 

 

 

(Уравнение 3)

На рис. 3 схематически показаны поверхностные плазмоны, связанные с колебаниями электронной плотности. Световая волна захватывается на поверхности металлического слоя за счет коллективной связи с электронами на металлической поверхности. Когда электронная плазма и электрическое поле световой волны соединяют свои частотные колебания, они входят в резонанс.[23][24]

SPRM Изображение 3.
Рисунок 3. Рисунок распространения поляритонов вдоль границы раздела металл-диэлектрик, области с богатой и низкой электронной плотностью обозначены как + и - соответственно.

Недавно были получены изображения утечки света внутри металлической поверхности.[25]Излучение разных длин волн (зеленое, красное и синее) преобразовывалось в поверхностные плазмонные поляритоны за счет взаимодействия фотонов на границе раздела металл / диэлектрик. Использовались две разные металлические поверхности; золото и серебро. Сравнивались длина распространения SPP в плоскости x-y (металлическая плоскость) в каждом металле и длина волны фотона. Длина распространения определяется как расстояние, пройденное SPP вдоль металла до того, как его интенсивность уменьшится в 1 / е, как определено в уравнении 4.[нужна цитата ]

На рисунке 4 показан свет утечки, захваченный цветной камерой CCD, зеленого, красного и синего фотонов в золотой (а) и серебряной (б) пленках. В части c) рисунка 4 показана интенсивность поверхностных плазмон-поляритонов с расстоянием. Было определено, что интенсивность света утечки пропорциональна интенсивности в волноводе.[нужна цитата ]

 

 

 

 

(Уравнение 4)

где δSPP - длина распространения; ε’m и ε’’’m - относительная диэлектрическая проницаемость металла, а λ0 - длина волны в свободном пространстве.[26]

Металлическая пленка способна поглощать свет из-за когерентных колебаний электронов зоны проводимости, вызванных взаимодействием с электромагнитным полем.[27]Электроны в зоне проводимости индуцируют поляризацию после взаимодействия с электрическим полем излучения. Чистая разница зарядов создается на поверхности металлической пленки, создавая коллективные дипольные колебания электронов одной фазы.[28]Когда движение электрона совпадает с частотой электромагнитного поля, происходит поглощение падающего излучения. Частота колебаний поверхностных плазмонов золота находится в видимой области электромагнитного спектра, что дает красный цвет, а серебро дает желтый цвет.[29]Наностержни демонстрируют два пика поглощения в УФ-видимой области из-за продольных и поперечных колебаний, для золотых наностержней поперечные колебания генерируют пик при 520 нм, в то время как продольные колебания генерируют поглощение на более длинных волнах в диапазоне от 600 до 800 нм.[29][30]Наночастицы серебра сдвигают свои длины волн поглощения света на более высокие энергетические уровни, где смещение синего идет от 408 нм до 380 нм и 372 нм, когда они меняются от сферы к стержню и проволоке соответственно.[31]Интенсивность поглощения и длина волны золота и серебра зависит от размера и формы частиц.[32]

На рисунке 5 размер и форма наночастиц серебра влияют на интенсивность рассеянного света и максимальную длину волны наночастиц серебра. Частицы треугольной формы выглядят красными с максимумом рассеянного света при 670–680 нм, пентагональные частицы отображаются зеленым (620–630 нм), а сферические частицы имеют более высокую энергию поглощения (440–450 нм) и отображаются синим цветом.[33]

Методы плазмонного возбуждения

Поверхностные плазмонные поляритоны представляют собой квазичастицы, состоящие из электромагнитных волн, связанных со свободными электронами зоны проводимости металлов.[34]Одним из широко используемых методов связи p-поляризованного света с границей раздела металл-диэлектрик является связь на основе призмы.[35]Призменные ответвители наиболее широко используются для возбуждения поверхностных плазмон-поляритонов. Этот метод также называется конфигурацией Кречмана – Ретера, где ПВО создает затухающую волну, которая связывает свободные электроны на поверхности металла.[36] Объективы с высокой числовой апертурой были исследованы как вариант призматической связи для возбуждения поверхностных плазмонных поляритонов.[15] Волноводная связь также используется для создания поверхностных плазмонов.

Призменная муфта

Конфигурация Кречмана – Ретера используется для достижения резонанса между светом и свободными электронами поверхности металла. В этой конфигурации призма с высоким показателем преломления соединена с металлической пленкой. Свет от источника распространяется через призму и падает на металлическую пленку. Как следствие ПВО, некоторые просочились через металлическую пленку, образуя затухающую волну в диэлектрической среде, как показано на рисунке 6.[12]Эванесцентная волна проникает на характерное расстояние в менее оптически плотную среду, где она ослабляется.[37]

На рис. 6 показана конфигурация Кречмана – Ретера, где призма с показателем преломления η1 связан с диэлектрической поверхностью с показателем преломления η2, угол падения света равен θ.

Взаимодействие между светом и поверхностными поляритонами в ПВО можно объяснить с помощью многослойного отражения Френеля; коэффициент отражения амплитуды (рpmd) выражается в уравнении 5 следующим образом.[38]

 

 

 

 

(Уравнение 5)

Коэффициент отражения мощности р определяется следующим образом:

 

 

 

 

(Уравнение 6)

На рисунке 7 показано схематическое изображение призмы связи Отто. На Рисунке 7 воздушный зазор был показан немного толстым только для объяснения схемы, хотя на самом деле воздушный зазор между призмой и металлическим слоем очень тонкий.

Волноводная связь

Электромагнитные волны проходят через оптический волновод. Когда свет попадает в область с тонким металлическим слоем, он быстро проникает через металлический слой, возбуждая поверхностную плазмонную волну (SPW). В конфигурации связи с волноводом волновод создается, когда показатель преломления решетки больше, чем у подложки. Падающее излучение распространяется вдоль волноводного слоя с высоким показателем преломления.[39]На рисунке 8 электромагнитные волны направляются через волноводный слой, когда оптические волны достигают границы раздела металла волноводного слоя, создается затухающая волна. Затухающая волна возбуждает поверхностный плазмон на границе раздела металл-диэлектрик.[40]

Решетчатая муфта

Благодаря периодической решетке легко добиться согласования фаз между падающим светом и волноводной модой.[41]Согласно уравнению 7 вектор распространения (Kz) в z направление можно настроить, изменив периодичность Λ. Вектор решетки можно изменять, а угол резонансного возбуждения можно регулировать.[42]На рисунке 9, q - порядок дифракции, он может принимать любые целые числа (положительные, отрицательные или нулевые).[43]

 

 

 

 

(Уравнение 7)

Методы измерения резонанса

Постоянная распространения монохроматического луча света, параллельного поверхности, определяется уравнением 8.[44]

 

 

 

 

(Уравнение 8)

где θ угол падения, kзр - постоянная распространения поверхностного плазмона, а п(п) - показатель преломления призмы. Когда волновой вектор СПВ, kзр соответствует волновому вектору падающего света , SPW выражается как:[44]

 

 

 

 

(Уравнение 9)

Вот εd и εm представляют диэлектрическую проницаемость диэлектриков и металла, а длина волны падающего света соответствуетλ. kx и ksp можно представить как:[44]

 

 

 

 

(Уравнение 10)

Поверхностные плазмоны представляют собой затухающие волны, которые имеют максимальную интенсивность на границе раздела и экспоненциально затухают при удалении от границы раздела фаз на глубину проникновения.[13]На распространение поверхностных плазмонов сильно влияет тонкопленочное покрытие проводящего слоя. Угол резонанса θ сдвигается, когда металлическая поверхность покрыта диэлектрическим материалом, из-за изменения вектора распространения k поверхностного плазмона.[45]Эта чувствительность обусловлена ​​малой глубиной проникновения исчезающей волны. Используются материалы с большим количеством свободных электронов. Используются металлические пленки толщиной примерно 50 нм из меди, титана, хрома и золота. Однако золото является наиболее распространенным металлом, используемым как в SPRM, так и в SPRM.

SPR под углом сканирования - это наиболее широко используемый метод обнаружения биомолекулярных взаимодействий.[40]Он измеряет процент отражения (% R) от сборки призма / металлическая пленка в зависимости от угла падения при фиксированной длине волны возбуждения. Когда угол падения совпадает с постоянной распространения границы раздела, эта мода возбуждается за счет расхода отраженного света. Как следствие, значение отражательной способности при резонансном угле сбрасывается.[46]

Постоянная распространения поляритонов может быть изменена путем изменения диэлектрического материала. Эта модификация вызывает смещение резонансного угла, как в примере, показанном на рисунке 10, от θ1 к θ2 из-за изменения постоянной распространения поверхностного плазмона.

Угол резонанса можно найти с помощью уравнения 11.

 

 

 

 

(Уравнение 11)

где п1 является п2 и пг - показатели преломления среды 1, 2 и металлического слоя соответственно.[46]

Использование двумерного изображения TIR позволяет добиться пространственных различий в% R при фиксированном угле.θ. Пучок монохроматического света используется для облучения образца при фиксированном угле падения. Изображение SPR создается из отраженного света, обнаруженного камерой CCD.[13]Минимальное значение% R при резонансном угле обеспечивает SPRM.[8]

Хуанг и его сотрудники разработали микроскоп с объективом с высокой числовой апертурой (NA), который улучшает поперечное разрешение за счет продольного разрешения.[47]

Боковое разрешение

Разрешение обычной световой микроскопии ограничено пределом дифракции света. В SPRM возбужденные поверхностные плазмоны принимают горизонтальную конфигурацию от падающего луча света. Поляритоны будут перемещаться вдоль границы раздела металл-диэлектрик в течение определенного периода, пока не распадутся обратно на фотоны. Таким образом, разрешение, достигаемое с помощью SPRM, определяется длиной распространения ksp поверхностных плазмонов, параллельных плоскости падения.[46]Расстояние между двумя областями должно быть приблизительно равным ksp, чтобы разрешить проблему. Бергер, Койман и Греве показали, что латеральное разрешение можно настроить, изменяя длину волны возбуждения, причем лучшее разрешение достигается при увеличении энергии возбуждения. Уравнения 4 и 12 определяют величину волнового вектора поверхностных плазмонов.[48]

 

 

 

 

(Уравнение 12)

где п2 - показатель преломления среды 2, пг - показатель преломления металлической пленки, а λ - длина волны возбуждения.[46]

Приборы

Микроскопия поверхностного плазмонного резонанса основана на резонансе поверхностных плазмонов и регистрации желаемых изображений структур, присутствующих на подложке, с использованием прибора, оснащенного камерой CCD. В последнее десятилетие было продемонстрировано, что зондирование SPR является чрезвычайно мощным методом и довольно широко используется в исследованиях и разработках материалов, биохимии и фармацевтических науках.[49]

Инструмент SPRM работает с комбинацией следующих основных компонентов: источник света (обычно гелий-неоновый лазер), который далее проходит через призму, прикрепленную к стеклянной стороне, покрытой тонкой металлической пленкой (обычно золотой или серебряной), где луч света отражается от границы раздела золото / раствор под углом, превышающим критический угол.[1] Отраженный свет от области поверхности раздела регистрируется детектором CCD, и записывается изображение. Хотя вышеупомянутые компоненты важны для SPRM, дополнительные аксессуары, такие как поляризаторы, фильтры, расширители луча, фокусирующие линзы, вращающийся столик и т. Д., Аналогично нескольким методам визуализации, устанавливаются и используются в инструментах для эффективной микроскопической техники, например требует приложение. На рисунке 12 показан типичный SPRM. В зависимости от приложений и для оптимизации техники визуализации исследователи модифицируют эту базовую аппаратуру с некоторыми изменениями конструкции, которые даже включают изменение исходного луча. Одним из таких конструктивных изменений, которые привели к другому SPRM, является тип объектива, показанный на рисунке 11, с некоторыми изменениями в оптической конфигурации.[47]

Системы SPRi в настоящее время производятся известными производителями биомедицинского оборудования, такими как GE Life Sciences, HORIBA, Biosensing USA и т. Д. Стоимость рейнджера SPRi составляет от 100 до 250 тысяч долларов США, хотя простые демонстрационные прототипы могут быть изготовлены за 2000 долларов США.[50]

Базовые приготовления

Для выполнения измерений для SPRM подготовка образца является критическим шагом. Шаг иммобилизации может повлиять на два фактора: один - это надежность и воспроизводимость полученных данных. Важно обеспечить устойчивость элемента распознавания; такие как антитела, белки, ферменты в условиях эксперимента. Более того, стабильность иммобилизованных образцов будет влиять на чувствительность и / или предел обнаружения (LOD).[51][52]

Один из самых популярных методов иммобилизации - это самосборный монослой (SAM) на поверхности золота. Дженкинс и соавторы, 2001, использовали меркаптоэтанольные пластыри, окруженные SAM, состоящим из октадекантиола (ODT), для изучения адсорбции яичного фосфатидилхолина на ODT SAM.[5] Образец ODT-меркаптоэтанола наносили на золотую пленку толщиной 50 нм. Золотая пленка получена термическим напылением на стекле ЛаСФН 9. Липидные везикулы осаждались на ODT SAM посредством адсорбции, давая конечную многослойную толщину более 80 Å.[нужна цитата ]

Самособирающийся монослой 11-меркаптоундекановой кислоты (MUA-SAM) формировали на предметных стеклах BK7, покрытых золотом. Пластина PDMS была замаскирована на микросхеме MUA-SAM. Кленбутерол (CLEN) был присоединен к молекулам BSA через амидную связь между карбоксильной группой BSA и аминогруппой молекул CLEN. Чтобы иммобилизовать BSA на поверхности золота, пятна, созданные в результате изготовления PDMS, были функционализированы с помощью сульфо-NHS ​​и EDC, затем 1% раствор BSA был налит в пятна и инкубирован в течение 1 часа. Неиммобилизованный BSA смывали PBS и раствор CLEN выливали на пятна, неиммобилизованный CLEN удаляли с помощью промывки PBS.[53]

Алкантиол-SAM был приготовлен для одновременного измерения концентрации пероксидазы хрена (Px), человеческого иммуноглобулина E (IgE), человеческого хориогонадотропина (hCG) и человеческого иммуноглобулина G (IgG) с помощью SPR. Алкантиолы, состоящие из углеродных цепей, состоящих из 11 и 16 атомов углерода, самостоятельно собирались на сенсорном чипе. Антитела были присоединены к алкантиолу C16, который имел концевую карбоксильную группу.[54]

Электрод с микрорельефом был изготовлен методом напыления золота на предметные стекла микроскопа. Штамповка PDMS использовалась для получения массива гидрофильных / гидрофобных поверхностей; Обработка ODT с последующим погружением в растворы 2-меркаптоэтанола создавала функционализированную поверхность для отложения липидных мембран. Узорчатый электрод характеризовали с помощью SPRM. На рисунке 14B изображение SPRM показывает размер карманов, который составлял 100 мкм x 100 мкм, а расстояние между ними составляло 200 мкм. Как видно на изображении, замечательный контраст изображения обусловлен высокой чувствительностью техники.[нужна цитата ]

Приложения

SPRM - это полезный метод измерения концентрации биомолекул в растворе, обнаружения связывающих молекул и мониторинга молекулярных взаимодействий в реальном времени. Его можно использовать в качестве биосенсора для поверхностных взаимодействий биологических молекул: связывания антиген-антитело, картирования и кинетики сорбции. Например, одной из возможных причин диабета 1 типа у детей является высокий уровень содержания в их сыворотке антител к коровьему молоку IgG, IgA, IgM (в основном за счет IgA).[55] Антитела к коровьему молоку можно обнаружить в образцах молока и сыворотки с помощью SPRM.[56]SPRM также полезен для обнаружения сайт-специфического прикрепления лимфоцитов B или T к массиву антител. Этот метод удобен для изучения взаимодействий клеток на поверхности без меток и в реальном времени. Таким образом, SPRM может служить инструментом диагностики кинетики адгезии на клеточной поверхности.[57]Однако, помимо достоинств, у SPRM есть ограничения. Это не применимо для обнаружения молекул с низким молекулярным весом. Несмотря на то, что это без этикеток, для этого потребуются кристально чистые экспериментальные условия. Чувствительность SPRM может быть улучшена с помощью сопряжения MALDI-MS.[58]Существует ряд приложений SPRM, некоторые из которых описаны здесь.

Мембранные белки

Мембранные белки отвечают за регуляцию клеточных ответов на внеклеточные сигналы. Было непросто исследовать участие мембранных белков в биомаркерах болезней и терапевтических мишенях, а также кинетику их связывания с их лигандами. Традиционные подходы не могли отразить четкие структуры и функции мембранных белков.[13]Чтобы понять структурные детали мембранных белков, необходим альтернативный аналитический инструмент, который может обеспечить трехмерное и последовательное разрешение, позволяющее контролировать мембранные белки. Атомно-силовая микроскопия (АСМ) - отличный метод для получения изображений мембранных белков с высоким пространственным разрешением,[59]но может оказаться бесполезным исследование его кинетики связывания. Флуоресцентная микроскопия (FLM) может использоваться для изучения взаимодействий мембранных белков в отдельных клетках, но для этого требуется разработка соответствующих меток и тактика для различных белков-мишеней.[60]Кроме того, мечение может влиять на белок-хозяин.[61]

Кинетику связывания MP в отдельных живых клетках можно изучить с помощью метода визуализации без метки на основе SPR-микроскопии без извлечения белков из клеточных мембран, что помогает ученым работать с фактическими конформациями мембранных белков. Кроме того, можно картировать и рассчитывать активность распределения и локального связывания мембранных белков в каждой клетке. SPR-микроскопия (SPRM) позволяет одновременно получать оптическое и флуоресцентное изображение одного и того же образца, что доказывает преимущества методов обнаружения на основе меток и без меток в одной установке.[47][62]

Обнаружение гибридизации ДНК

Визуализация SPR используется для изучения множественных адсорбционных взаимодействий в формате массива в одних и тех же экспериментальных условиях. Нельсон и его коллеги представили многоступенчатую процедуру создания массивов ДНК на золотых поверхностях для использования с визуализацией SPR.[63] Аффинные взаимодействия могут быть изучены для множества целевых молекул, например белки и нуклеиновые кислоты. Несоответствие оснований в последовательности ДНК приводит к ряду смертельных заболеваний, таких как синдром Линча, который имеет высокий риск рака толстой кишки.[64]

Получение изображений методом ППР полезно для отслеживания адсорбции молекул на поверхности золота, которая возможна из-за изменения отражательной способности от поверхности. Первая пара несоответствия G-G стабилизируется путем присоединения ее к лиганду, димеру нафтиридина, посредством водородных связей, которые образуют шпилечные структуры в двухцепочечной ДНК на поверхности золота. Связывание димера с ДНК увеличивает свободную энергию гибридизации, что вызывает изменение показателя преломления.[65]

SPRM Изображение 15.
Рисунок 15. Структура несоответствия G – G, стабилизирующего димер нафтиридина (синий), показана водородными связями с двумя гуаниновыми основаниями (черный).[65]

Массив ДНК изготовлен для проверки стабилизирующих свойств G-G несоответствия димера нафтиридина. Каждая из четырех иммобилизованных последовательностей в массиве отличалась одним основанием. Положение этого основания обозначено X в последовательности 1, как показано на Фигуре 16. Изображение разницы SPR обнаруживается только для последовательности, имеющей основание цитозина (C) в положении X в последовательности 1, последовательности, комплементарной последовательности 2. Однако изображение разности SPR, соответствующее добавлению последовательности 2 в присутствии димера нафтиридина, показывает, что, помимо своего комплемента, последовательность 2 также гибридизируется с последовательностью, которая формирует несоответствие G-G. Эти результаты демонстрируют, что визуализация SPR является многообещающим инструментом для мониторинга несоответствий отдельных оснований и скрининга гибридизированных молекул.[65]

Связывание антител с белковыми массивами

Визуализацию SPR можно использовать для изучения связывания антител с белковым массивом.[66] Функциональность амина на поверхности золота с массивом белков используется для изучения связывания антител. Иммобилизация белка осуществлялась путем пропускания белковых растворов через микроканалы PDMS. Затем PDMS удаляли с поверхности и растворы антител пропускали через массив. Трехкомпонентный протеиновый массив, содержащий белки фибриноген человека, овальбумин и бычий IgG, показан на Фигуре 17, изображения SPR получены Кариуки и соавторами. Этот контраст в массиве обусловлен разницей показателя преломления, которая является результатом местного связывания антител. Эти изображения показывают, что существует высокая степень специфичности связывания антитела и небольшая степень неспецифической адсорбции антитела на фоне массива, которую можно улучшить, чтобы изменить фон массива. Основываясь на этих результатах, метод визуализации SPR может быть выбран в качестве диагностического инструмента для изучения взаимодействий антител с белковыми массивами.[66][67]

В сочетании с масс-спектрометрией

Открытие и проверка белковых биомаркеров имеют решающее значение для диагностики заболеваний.Сочетание SPRM с MALDI-масс-спектрометром (SUPRA-MS) позволяет многократно количественно определять связывание и молекулярные характеристики на основе различных масс. SUPRA-MS используется для обнаружения, идентификации и характеристики потенциального биомаркера рака груди, белка LAG3, введенного в плазму человека. Стеклянные предметные стекла были взяты для приготовления золотой стружки путем покрытия тонкими слоями хрома и золота методом распыления. Поверхность золота функционализировали с использованием раствора 11-меркапто-1-ундеканола (11-MUOH) и 16-меркапто-1-гексадекановой кислоты (16-MHA). Этот самоорганизующийся монослой активировали сульфо-NHS ​​и EDC. На макроматрицу нанесен узор из шестнадцати капель. Антитела иммуноглобина G выявляли против гена активации лимфоцитов 3 (α-LAG3) и сывороточного альбумина крысы (α-RSA). После помещения биочипа в SPRi и подачи буферного раствора в проточную ячейку был введен α-LAG3. На прикрепленных белках использовалась специальная станция изображения. Эту станцию ​​также можно разместить на МАЛДИ. Перед размещением на MALDI захваченные белки восстанавливали, переваривали и загружали матрицей, чтобы избежать загрязнения.[58]

Плотность антигена прямо пропорциональна изменению отражательной способности ΔR, поскольку глубина проникновения исчезающей волны Lzc больше, чем толщина слоя иммобилизованного антигена.[68]

Плотность антигена

 

 

 

 

(Уравнение 13)

где - приращение индекса молекулы и призма чувствительности, отражательная способность.

Чистый масс-спектр был получен для белка LAG3 благодаря хорошему расщеплению трипсином и гомогенности матрицы (α-циано-4-гидроксикоричная кислота). Относительно высокая интенсивность пика m / z белка LAG3 была обнаружена при 1422,70amu со средней оценкой талисмана 87,9 ± 2,4. Подтверждение результатов МС было дополнительно подтверждено анализом МС-МС. Эти результаты аналогичны классическим аналитическим методам разложения в геле.[58]

Больше S/N > 10, 100% надежность и обнаружение на уровне фемтомолей на кристалле доказывают надежность этого метода связи. Можно обнаружить белок-белковое взаимодействие и распределение пептидов на чипе с высоким пространственным разрешением, используя данную методику.[58]

ДНК-аптамеры

Аптамеры - это особые лиганды ДНК, которые нацелены на биомолекулы, такие как белки. Платформа визуализации SPR может быть хорошим выбором для характеристики взаимодействий аптамер-белок. Чтобы изучить взаимодействие аптамер-белок, первые олигонуклеотиды прививают путем образования тиолового самоорганизующегося монослоя (SAM) на золотом субстрате с использованием пьезоэлектрической системы дозирования. Тиоловые группы вводятся в нуклеотиды ДНК N-гидроксисукцинимидом (NHS). Целевые олигонуклеотиды, содержащие первичную аминогруппу на 59-м конце, конъюгированы с HS-C (11) -NHS в фосфатном буферном растворе при pH 8,0 в течение одного часа при комнатной температуре.[нужна цитата ] Биосенсор для трансплантации аптамера помещают на SPRM после промывки. Затем совместно вводят тромбин с избытком цитохрома С для специфичности сигнала. Концентрацию свободного тромбина определяют по калибровочной кривой, полученной путем построения графика зависимости начального наклона сигнала в начале инъекции от концентрации. Взаимодействие тромбина и аптамера можно отслеживать на микрочипе в режиме реального времени во время инъекций тромбина в различных концентрациях. Константа диссоциации фазы раствора KDsol (3,16 ± 1,16 нМ) вычисляется из измеренных концентраций свободного тромбина.[нужна цитата ]

 

 

 

 

(Ур.14)

[THR --- APT] = cTHR - [THR], равновесная концентрация тромбина, присоединенного к аптамеру в растворе, и [APT] = cAPT - [THR --- APT], концентрация свободных аптамеров в растворе.

Константа диссоциации поверхностной фазы KDsurf (3,84 ± 0,68) получена путем аппроксимации изотермы адсорбции Ленгмюра по сигналам равновесия. Обе константы диссоциации существенно различаются, поскольку KDsurf зависит от плотности поверхностной прививки, как показано на рисунке 19. Эта зависимость линейно экстраполируется при низком значении сигма на сродство к фазе раствора.[нужна цитата ]

Разница в изображении SPRi может дать нам информацию о наличии связывания и специфичности, но не подходит для количественной оценки свободного белка в случае наличия нескольких аффинных сайтов. Мониторинг взаимодействия в реальном времени возможен с помощью SPRM для изучения кинетики и сродства взаимодействий.[69]

Обнаружение полимерного взаимодействия

Несмотря на использование изображения поверхностного плазмонного резонанса (SPRi) в биологии для характеристики взаимодействий между двумя биологическими молекулами, также полезно отслеживать взаимодействия между двумя полимерами. В этом подходе один полимер, называемый хозяйским белком HP, иммобилизуется на поверхности биочипа, а другой полимер, обозначенный как гостевой полимер GP, вставляется в SPRi-Biochip для изучения взаимодействий. Например, белок-хозяин из функционализированного амином поли (β-циклодекстрина) и белок-гостя PEG (ada) 4.[нужна цитата ]

Биочип SPRi использовался для иммобилизации HP разной концентрации. На чипе был создан массив активных сайтов HP. Присоединение HP осуществлялось через его аминогруппы к N-гидроксисукцинимидным функциональным группам на поверхности золота. Сначала система SPRi заполнялась рабочим буферным раствором с последующим помещением SPRi –биочипа в аналитическую камеру. В проточную ячейку вводили два раствора с различной концентрацией GP 1 г / л и 0,1 г / л. Ассоциацию и диссоциацию обоих полимеров можно отслеживать в реальном времени на основе изменения отражательной способности, а изображения, полученные с помощью SPRM, можно различать на основе белых пятен (фаза ассоциации) и черных пятен (фаза диссоциации). ПЭГ без адамантильных групп не демонстрировал адсорбции на полостях β-циклодекстрина. С другой стороны, адсорбция GP без HP на чипе не происходила. Изменение отклика SPRi на участках реакции обеспечивается снятием кинетических кривых и изображений в реальном времени с камеры CCD. Локальные изменения отражательной способности света напрямую связаны с количеством целевых молекул в каждой точке. Вариации на поверхности чипа дают исчерпывающие сведения о молекулярном связывании и кинетических процессах.[70]

Биоминерализация

Одним из важных классов биоматериалов является полимерный гидроксиапатит, который чрезвычайно полезен в области регенерации костей из-за его сходства с натуральным костным материалом. Преимущество гидроксиапатита, (Ca10 (PO4) 6 (OH) 2, начинает формироваться внутри костной ткани посредством минерализации, которая также способствует усилению остеоинтеграции. Биоминерализацию также называют кальцификацией, при которой катионы кальция поступают из клеток и физиологических жидкости, в то время как фосфат-анионы образуются в результате гидролиза сложных фосфоэфиров и фосфопротеинов, а также из жидкостей организма. Это явление также проверено исследованиями in vitro.[нужна цитата ]

Для исследований in vitro дендримеры полиамидоамина (PAMAM) с внешними реактивными оболочками на основе амино- и карбоновых кислот рассматриваются как сенсорная фаза. Эти дендримеры должны быть иммобилизованы на поверхности золота и неактивны по отношению к поверхности золота. Следовательно, тиоловые группы должны быть введены на концах дендримеров, чтобы дендримеры могли быть прикреплены к поверхности золота. Карбоксильные группы функционализированы растворами N, N- (3-диметиламинопропил) -N’-этилкарбодиимида гидрохлорида (EDC) и N-гидроксисукцинимида (NHS) в фосфатном буфере. Функциональные группы (амид, амино и карбоксил) действуют как ионные насосы, улавливая ионы кальция из тестовых жидкостей; затем катионы кальция связываются с фосфат-анионами с образованием ядер кальций-фосфатных минералов на поверхности дендримера.[нужна цитата ]

Ожидается, что SPRM будет достаточно чувствительным, чтобы предоставить важную количественную информацию о возникновении и кинетике минерализации. Это обнаружение минерализации основано на изменении удельной массы, вызванном образованием и ростом минеральных ядер. Зарождение зародышей и прогресс минерализации можно отслеживать с помощью SPRM, как показано на рисунке 20. PAMAM-содержащие сенсоры фиксируются на платформе анализа SPRi, а затем подвергаются воздействию экспериментальных жидкостей в проточной ячейке, как показано на рисунке 21. SPRM не адаптирован для обнаружения происхождение и характер изменения массы, но он обнаруживает изменение показателя преломления из-за минеральных осадков.[нужна цитата ]

использованная литература

  1. ^ а б c Кэмпбелл, C, T; Ким, G (2007). «SPR-микроскопия и ее приложения для высокопроизводительного анализа событий биомолекулярного связывания и их кинетики». Биоматериалы. 28 (15): 2380–2392. Дои:10.1016 / j.biomaterials.2007.01.047. PMID  17337300.
  2. ^ Петерсон, А, Вт; Холтер, М; Тона, А; Завод, А, Л (2014). «Плазмонно-резонансная томография единичных клеток с высоким разрешением». BMC Cell Biology. 15 (35): 2–14. Дои:10.1186/1471-2121-15-35. ЧВК  4289309. PMID  25441447.
  3. ^ Хассани, Хоссейн; Вольф, Николаус Раджа; Юань, Сяобо; Вёрденвебер, Роджер; Оффенхойссер, Андреас (12 июня 2020 г.). «Платиновая подложка для поверхностной плазмонной микроскопии под малыми углами». Письма об оптике. 45 (12): 3292–3295. Дои:10.1364 / OL.396051.
  4. ^ Хикель, Вт; Камп, Д; Knoll, W. (1989). «Микроскопия поверхностного плазмона». Природа. 339 (6221): 186. Bibcode:1989Натура.339..186H. Дои:10.1038 / 339186a0.
  5. ^ а б Дженкинс, А; Нейман, Т; Оффенхауссер, А (2001). «Измерения адсорбции липидных пузырьков на самоорганизующемся монослое с микрорельефами с помощью микроскопии поверхностного плазмона». Langmuir. 17 (2): 265–267. Дои:10.1021 / la991680q.
  6. ^ Николетти, О; Де Ла Пена, Ф; Лири, Р., К.; Голландия, Д, Дж; Ducati, C; Мидгли, П., А (2013). «Трехмерное изображение локализованных поверхностных плазмонных резонансов металлических наночастиц». Природа. 502 (7469): 80–84. Bibcode:2013Натура.502 ... 80Н. Дои:10.1038 / природа12469. PMID  24091976.
  7. ^ Тиль, А, Дж; Frutos, A, G; Иордания, C, E; Кукуруза, R, M; Смит, Л. М. (1997). "Обнаружение поверхностного плазменного резонанса на месте при гибридизации ДНК с олигонуклеотидными матрицами на поверхности золота". Аналитическая химия. 69 (24): 4948–4956. Дои:10.1021 / ac9708001.
  8. ^ а б Зизиспергер, М; Knoll, W. (1998). «Многоточечный параллельный онлайн-мониторинг реакций межфазного связывания с помощью поверхностной плазмонной микроскопии». Прогресс в науке о коллоидах и полимерах. 109: 244–253. Дои:10.1007 / bfb0118177. ISBN  978-3-7985-1113-2.
  9. ^ Flatgen, G; Krischer, K; Эртл, Г. (1996). «Формирование пространственно-временного паттерна при восстановлении пероксодисульфата в бистабильном и колебательном режиме: исследование поверхностной плазмонной микроскопии». Журнал электроаналитической химии. 409 (1–2): 183–194. Дои:10.1016/0022-0728(96)04511-1.
  10. ^ Агранович, В, М; Миллс, Д. Л. (1982). Поверхностные поляритоны - электромагнитные волны на поверхности и границах раздела.. Нью-Йорк, Нью-Йорк: Северная Голландия.
  11. ^ Ян, X, Y; Се, W, C; Лю, Д., М. (2008). «Разработка высокочувствительных датчиков поверхностного плазмонного резонанса с использованием плоских металлических пленок, тесно связанных с нанорешетками». Письма о китайской физике. 25 (1): 148–151. Bibcode:2008ЧФЛ..25..148Л. Дои:10.1088 / 0256-307x / 25/1/041.
  12. ^ а б Тан, Y; Цзэн, X; Лян, Дж (2010). "Поверхностный плазмонный резонанс: введение в метод поверхностной спектроскопии". Журнал химического образования. 87 (7): 742–746. Bibcode:2010JChEd..87..742T. Дои:10.1021 / ed100186y. ЧВК  3045209. PMID  21359107.
  13. ^ а б c d Вэй, Вт; Юнзе, Y; Шаопэн, Вт; Vinay, J, N; Цян, L; Джи, Вт; Нунцзянь, Т. (2012). «Измерение и картирование кинетики связывания мембранных белков в отдельных живых клетках без использования меток». Химия природы. 4 (10): 846–853. Bibcode:2012НатЧ ... 4..846Вт. Дои:10.1038 / nchem.1434. ЧВК  3660014. PMID  23000999.
  14. ^ Halpern, Aaron R .; Вуд, Дженнифер Б.; Ван, Юн; Кукуруза, Роберт М. (28 января 2014 г.). "Плазмонно-резонансная микроскопия поверхности одиночных наночастиц в ближнем инфракрасном диапазоне для измерения адсорбции гибридизации ДНК в реальном времени". САУ Нано. 8 (1): 1022–1030. Дои:10.1021 / nn405868e. ISSN  1936-0851. PMID  24350885.
  15. ^ а б Абедин, Шамсул; Кенисон, Джон; Варгас, Кристиан; Потма, Эрик Олаф (17.12.2019). «Чувство биомолекулярных взаимодействий по люминесценции плоской золотой пленки». Аналитическая химия. 91 (24): 15883–15889. Дои:10.1021 / acs.analchem.9b04335. ISSN  0003-2700. PMID  31755696.
  16. ^ Ротенхауслер, Б. Knoll, W. (1988). «Поверхностная плазмонная микроскопия». Природа. 332 (6165): 615–617. Bibcode:1988Натура.332..615р. Дои:10.1038 / 332615a0.
  17. ^ Spoto, G; Минунни, М (2012). «Поверхностная плазмонная резонансная томография: что дальше?». Письма в Журнал физической химии. 3 (18): 2682–2691. Дои:10.1021 / jz301053n. PMID  26295892.
  18. ^ Миллс, D, L; Бурштейн, Э (1974). «Поляритоны: электромагнитные моды сред». Отчеты о достижениях физики. 37 (7): 817–926. Bibcode:1974РПФ ... 37..817М. Дои:10.1088/0034-4885/37/7/001.
  19. ^ Klotzbach, U; Лазаньи, А, Ф; Панзнер, М; Фолькер, Ф (2011). «Изготовление и определение характеристик в диапазоне микронано». Улучшенные структурные материалы. 10: 29–46. Дои:10.1007/978-3-642-17782-8_2.
  20. ^ Плазмонные наногиды и схемы: нанофотонные компоненты, использующие канальные плазмонные поляритоны. Сингапур: Пан Стэнфорд. 2009 г.
  21. ^ Хо, Н, П; Ву, С., Й (2007). Нанотехнологии в биологии и медицине Методы, устройства и приложения: зондирование биомолекул с использованием поверхностного плазмонного резонанса. Бока-Ратон: Тейлор и Фрэнсис Групп. п. 792.
  22. ^ Тоомре, D; Манштейн, Д. Дж. (2001). «Освещение поверхности клетки с помощью микроскопии с исчезающими волнами». Тенденции в клеточной биологии. 11 (7): 298–303. Дои:10.1016 / s0962-8924 (01) 02027-х. PMID  11413041.
  23. ^ Барнс, W, L; dereux, A; Эббесен, Т., В. (2003). «Субволновая оптика поверхностных плазмонов». Природа. 424 (6950): 824–830. Bibcode:2003Натура.424..824Б. Дои:10.1038 / природа01937. PMID  12917696.
  24. ^ Бенсон, О. (2011). «Сборка гибридных фотонных архитектур из нанофотонных составляющих». Природа. 480 (7376): 193–199. Bibcode:2011Натура.480..193Б. Дои:10.1038 / природа10610. PMID  22158243.
  25. ^ Пан, M, Y; Lin, E, H; Ван, Л; Вэй, П., К. (2014). «Спектральные и модовые свойства поверхностных плазмон-поляритонных волноводов, исследованные методами возбуждения в ближней зоне и измерения излучения в режиме утечки». Письма о наномасштабных исследованиях. 9 (1): 430. Bibcode:2014НРЛ ..... 9..430П. Дои:10.1186 / 1556-276x-9-430. ЧВК  4145364. PMID  25177228.
  26. ^ Барнс, В., Л. (2006). «Поверхностные шкалы длин плазмон-поляритонов: путь к субволновой оптике». Журнал оптики A: Чистая и прикладная оптика. 8 (4): 87–93. Bibcode:2006JOptA ... 8S..87B. Дои:10.1088 / 1464-4258 / 8/4 / S06.
  27. ^ Mulvaney, P (1996). «Поверхностная плазмонная спектроскопия наноразмерных металлических частиц». Langmuir. 12 (3): 788–800. Дои:10.1021 / la9502711.
  28. ^ Тивари, А; Нараян, Дж (2005). Наноинженерия структурных, функциональных и интеллектуальных материалов: самоорганизованные наноточки Au в матрице ZnO: новый способ улучшения электрических и оптических характеристик пленок ZnO. Бока-Ратон: Тейлор и Фрэнсис Групп. п. 740.
  29. ^ а б Юстис, S; Эль-Сайед, М. (2006). «Почему наночастицы золота более ценны, чем красивое золото: поверхностный плазмонный резонанс благородных металлов и его улучшение радиационных и безызлучательных свойств нанокристаллов различной формы». Обзоры химического общества. 35 (3): 209–217. Дои:10.1039 / b514191e.
  30. ^ Ким, F, H; Песня, Дж; Ян, П (2002). «Фотохимический синтез золотых наностержней». Журнал Американского химического общества. 124 (48): 14316–14317. Дои:10.1021 / ja028110o. PMID  12452700.
  31. ^ Ху, Дж, Дж; Чен, Q; Се, Z, X; Хан, G, B; Ван, Р., Н; Рен, В; Zhang, Y; Ян, Z, L; Тиан, З., К (2004). «Простой и эффективный способ синтеза наностержней и нанопроволок кристаллического серебра». Современные функциональные материалы. 14 (2): 183–189. Дои:10.1002 / adfm.200304421.
  32. ^ Анкер, Дж., Н.; Холл, W, P; Ляндрес, О; Шах, N, C; Чжао, Дж; Ван Дайн, Р., П. (2008). «Биосенсор с плазмонными наносенсорами». Материалы Природы. 7 (6): 442–453. Bibcode:2008НатМа ... 7..442А. Дои:10.1038 / nmat2162. PMID  18497851.
  33. ^ Mock, J, J; Барбик, М; Смит, Д., Р.; Шульц, Д., А; Шульц, S (2002). «Эффекты формы в плазмонном резонансе индивидуальных наночастиц коллоидного серебра». Журнал химической физики. 116 (15): 6755–6759. Bibcode:2002ЖЧФ.116.6755М. Дои:10.1063/1.1462610.
  34. ^ Карпинский, П; Миневич, А (2011). «Возбуждение поверхностных плазмонных поляритонов в металлическом слое через поверхностные рельефные решетки в фотоактивном полимере, исследованное методом конечных разностей во временной области». Плазмоника. 6 (3): 541–546. Дои:10.1007 / s11468-011-9234-3. ЧВК  3151570. PMID  21949485.
  35. ^ Мукхерджи, S; Hossain, M, I; Кунду, Т; Чандратре, Д. (2014). Микро- и интеллектуальные устройства и системы: разработка биосенсорной системы на основе поверхностного плазмонного резонанса. Springer.
  36. ^ Kreyschmann, E; Raether, H (1968). «Радиационный распад безызлучательных поверхностных плазмонов, возбужденных светом». З. Натурфорш. 23а: 2135–2136. Дои:10.1515 / зна-1968-1247.
  37. ^ Сехар, П., К; Uwizeye, V (2012). MEMS для биомедицинских приложений: обзор датчиков и исполнительных механизмов для bioMEMS. Кембридж: Кембридж.
  38. ^ Хомола, Дж (2006). Датчики на основе поверхностных плазмонов: электромагнитная теория поверхностных плазмонов. Springer. С. 3–44.
  39. ^ Schimitt, K; Хоффманн, С (2010). Платформы с волноводом с высоким показателем преломления для химических и биодатчиков. Springer-Verlag. Bibcode:2010ogwc.book ... 21S.
  40. ^ а б Хомола, Дж (2003). «Настоящее и будущее биосенсоров поверхностного плазмонного резонанса». Аналитическая и биоаналитическая химия. 377 (3): 528–539. Дои:10.1007 / s00216-003-2101-0. PMID  12879189.
  41. ^ Солгаард, О (2009). Фотонные микросистемы Микро и нанотехнологии в оптических устройствах и системах. Springer. Bibcode:2009pmmn.book ..... S.
  42. ^ Knoll, Вт; Касри, А; Лю, Дж; Нейман, Т; Niu, L; Парк, H; Paulsen, H; Робелек, Р; Яо, D; Ю, Ф (2008). Справочник по поверхностному плазмонному резонансу: методы поверхностной плазмонной флуоресценции для исследований биоаффинности. Издательство РСК.
  43. ^ Баба, А; Канеко, Ф; Advincula, R; Knoll, W. (2011). Функциональные полимерные пленки: 2 набора томов: методы электрохимического поверхностного плазмонного резонанса для тонких полимерных пленок. weinheim: Wiley -VCH Verlag GmbH & Co. стр. 1128.
  44. ^ а б c Gwon, H, R; Ли, С., Х (2010). «Спектральные и угловые характеристики поверхностного плазмонного резонанса на основе конфигурации призмы Кречмана». Материалы Сделки. 51 (6): 1150–1155. Дои:10.2320 / matertrans.m2010003.
  45. ^ Гупта, Б, Д; Джа, Р. (2015). Справочник по оптическим датчикам: Измерение поверхностного плазмона: принципы и методы. Бока-Ратон: Тейлор и Фрэнсис Групп.
  46. ^ а б c d Giebel, K, F; Бехингер, К; Herminghaus, S; Ридель, М; Leiderer, P; Weiland, U; Бастмейер, М. (1999). «Визуализация контактов живых клеток с субстратом с помощью поверхностной плазмонной микроскопии». Биофизический журнал. 76: 509–516. Дои:10.1016 / с0006-3495 (99) 77219-х. ЧВК  1302541. PMID  9876164.
  47. ^ а б c Хуанг, Б; Ю, Ф; Заре, Р., Н. (2007). «Построение изображений поверхностного плазмонного резонанса с использованием объектива микроскопа с высокой числовой апертурой». Аналитическая химия. 79 (7): 2979–2983. Дои:10.1021 / ac062284x. PMID  17309232.
  48. ^ Бергер, C, E, H; Койман, Р., П, Н; Греве, J (1994). «Разрешение в микроскопии поверхностного плазмона». Обзор научных инструментов. 65 (9): 2829–2836. Bibcode:1994RScI ... 65.2829B. Дои:10.1063/1.1144623.
  49. ^ Шумакер-Парри, Дж; Кэмпбелл, C, T (2004). "Количественные методы измерения пространственно-разрешенной адсорбции / десорбции в реальном времени с помощью SPR-микроскопии". Аналитическая химия. 76 (4): 907–917. Дои:10.1021 / ac034962a. PMID  14961720.
  50. ^ Ицзюнь, Т; Xiangqun, Z; Дженнифер, L (2010). "Поверхностный плазмонный резонанс: введение в метод поверхностной спектроскопии". Журнал химического образования. 87 (7): 742–746. Bibcode:2010JChEd..87..742T. Дои:10.1021 / ed100186y. ЧВК  3045209. PMID  21359107.
  51. ^ Скарано, S; Mascini, M; Тернер, А; Минунни, М (2010). «Поверхностная плазмонная резонансная томография для биосенсоров на основе аффинности». Биосенсоры и биоэлектроника. 25 (5): 957–966. Дои:10.1016 / j.bios.2009.08.039. HDL:1826/4104. PMID  19765967.
  52. ^ Хомола, Дж (2008). «Датчики поверхностного плазмонного резонанса для обнаружения химических и биологических видов». Химические обзоры. 108 (2): 462–493. Дои:10.1021 / cr068107d. PMID  18229953.
  53. ^ Яо, М; Wu, Y; Клык, X; Ян, Y; Лю, Х (2015). «Спектральная поверхностная плазмонная резонансная томография для обнаружения кленбутерола с помощью трехмерных иммобилизационных биозондов». Аналитическая биохимия. 475: 40–43. Дои:10.1016 / j.ab.2015.01.012. PMID  25637304.
  54. ^ Hamola, J; Вайсочерова, Н; Досталек, Дж; Пиларик, М (2005). "Мультианализируемый поверхностный плазмонный резонансный биосенсор". Методы. 37 (1): 26–36. Дои:10.1016 / j.ymeth.2005.05.003. PMID  16199172.
  55. ^ М. Виртанен С., Т. Саукконен, Э. Савилахти, К. Илонен, Л. Рясанен, А. Аро, М. Книп, Й. Туомилехто и Х. Акерблом, «Диета, антитела к белку коровьего молока и риск ИЗСД у Финские дети. Группа по изучению детского диабета в Финляндии, "Диабетология", стр. 37 (4): 381–7, 1994.
  56. ^ Скарано, S; Скуффи, К; Mascini, M; Минунни, М. (2011). «Поверхностное плазмонно-резонансное зондирование на основе визуализации для обнаружения бычьих иммуноглобулинов в материнском молоке и сыворотке». Анальный Chim Acta. 707 (1–2): 178–183. Дои:10.1016 / j.aca.2011.09.012. HDL:2158/542157. PMID  22027136.
  57. ^ Суранити, Э; Sollier, E; Калемчук, Р; Ливаче, Т; Marche, P, N; Villersb, M, B; Рупиоз, Y (2007). «Обнаружение связывания лимфоцитов на чипе с антителами в реальном времени с помощью SPR-визуализации» (PDF). Лабораторный чип. 7 (9): 1206–1208. Дои:10.1039 / b708292d. PMID  17713622.
  58. ^ а б c d Реми-Мартин, Ф; Эль-Оста, М; Лучхи, Г; Zeggary, R; Леблуа, Т; Беллон; Ducoroy, P; Буаро, Вт (2012). «Поверхностная плазмонная резонансная томография в массивах в сочетании с масс-спектрометрией (SUPRA-MS): доказательство концепции встроенной характеристики потенциального рака груди в плазме человека». Аналитическая и биоаналитическая химия. 404 (2): 423–432. Дои:10.1007 / s00216-012-6130-4. PMID  22699232.
  59. ^ Li, G, Y; Xi, N; Ван, Д, Х (2006). «Исследование мембранных белков с использованием атомной силовой микрокопии». Журнал клеточной биохимии. 97 (6): 1191–1197. Дои:10.1002 / jcb.20753. PMID  16440319.
  60. ^ Гровс, Дж, Т; Parthasarathy, R; Форстнер, М., Б. (2008). «Флуоресцентная визуализация динамики мембраны». Анну. Преподобный Биомед. Англ.. 10: 311–338. Дои:10.1146 / annurev.bioeng.10.061807.160431. PMID  18429702.
  61. ^ Джонсон, А, Е (2005). «Флуоресцентные подходы для определения конформации белков, взаимодействий и механизмов на мембранах». Движение. 6 (12): 1078–1092. Дои:10.1111 / j.1600-0854.2005.00340.x. PMID  16262720.
  62. ^ Ванга, Вт; Фоли, К; Шан, Х; Ван, S; Eaton, S; Nagraj, V, J; Виктор, П; Patel, U; Тао, Н. (2011). «Отдельные клетки и внутриклеточные процессы изучаются с помощью плазмонной электрохимической импедансной микроскопии». Химия природы. 3 (3): 249–255. Bibcode:2011НатЧ ... 3..251Вт. Дои:10.1038 / nchem.961. ЧВК  3309525. PMID  21336333.
  63. ^ Нельсон, Б., П; Гримсруд, Т., Э .; Liles, M, R; Гудман, Р., М.; Кукуруза, Р., М. (2001). "Измерения поверхностной плазмонной резонансной визуализации адсорбции гибридизации ДНК и РНК на ДНК-микрочипах". Аналитическая химия. 73 (1): 1–7. Дои:10.1021 / ac0010431. PMID  11195491.
  64. ^ Kastrinos, F; Мукерджи, B; Тайоб, Н; Ванга, Ф; Спарр, Дж; Раймонд, В, М; Bandipalliam, P; Стофелл, Э, М; Грубер, S, B; Syngal, S (2009). «Риск рака поджелудочной железы в семьях с синдромом Линча». JAMA. 302 (16): 1790–1795. Дои:10.1001 / jama.2009.1529. ЧВК  4091624. PMID  19861671.
  65. ^ а б c Смит, E, A; Kyo, M; Кумасава, H; Накатани, К; Сайто, я; Кукуруза, Р., М. (2002). «Химически индуцированное образование шпильки в монослоях ДНК». Журнал Американского химического общества. 124 (24): 6810–6811. Дои:10.1021 / ja026356n. PMID  12059186.
  66. ^ а б Канда, В; Кариуки, Дж. К.; Харрисон, Д. Дж .; Макдермотт, М., Т (2004). «Чтение без метки иммуноанализов на основе микрочипов с поверхностной плазмонной резонансной томографией». Аналитическая химия. 76 (24): 7257–7262. Дои:10.1021 / ac049318q. PMID  15595867.
  67. ^ Кариуки, Дж. К.; Канда, В; Мак Дермотт, М., Т; Харрисон, Д. Дж. (2002). Системы Micro Total Analysis. Нара: академический издатель Kluwer. С. 230–232.
  68. ^ Э. Стенберг, Б. Перссон, Х. Роос и Урбаницки., J. Colloids Interface Sci, стр. 143: 513–526, 1991.
  69. ^ Daniel, C; Рупиоз, Y; Гаспарутти, Д; Ливаче, Т; Бухот, А (2013). «Фаза раствора против сродства аптамера к белку поверхностной фазы с кинетического биосенсора без этикеток». PLOS ONE. 8 (9): e75419. Bibcode:2013PLoSO ... 875419D. Дои:10.1371 / journal.pone.0075419. ЧВК  3775802. PMID  24069412.
  70. ^ Vollmer, N; Тромбини, F; Хели, М; Bellon, S; Мерсье, К; Казенев, C (2015). «Методика изучения взаимодействия полимеров методом поверхностного плазмонного резонанса». МетодыX. 2: 14–18. Дои:10.1016 / j.mex.2014.12.001. ЧВК  4487328. PMID  26150967.